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        中壓層析柱的操作步驟

        更新時(shí)間:2023-03-14      點(diǎn)擊次數:987
          中壓層析柱是利用生物分子間所具有純化技術(shù),它是利用生物分子間存在的特異性相互作用,通過(guò)將具有親和力的兩個(gè)分子中的一個(gè)固定在不溶性基質(zhì)上,利用分子間親和力的特異性和可逆性,對另一個(gè)分子進(jìn)行分離純化。
         
          中壓層析柱的操作步驟:
         
          1 準 備
         
          在裝柱前,建議采用靜置沉淀法,確定膠懸液濃度,我們的填料是以50%的濃度儲存在20%的乙醇中。
         
          2 檢 查
         
          裝柱需借助裝柱系統完成,所有的組件必須處于完好的狀態(tài),檢查玻璃部件,特別注意端部,應更換末端有缺口的柱子。
         
          3 清 洗
         
          柱子和裝柱器在使用前,應用20%乙醇潤洗,檢查篩板,確保所選篩板的孔徑和所選填料的粒徑相匹配,確保底端部件和頂部適配器的管件連接牢固。
         
          4 安 裝
         
          1) 柱子用柱夾或鐵架臺固定,確保柱管沒(méi)有傾斜,垂直于地面,避免裝好的柱子出現寬泛而彎曲的條帶。
         
          2)向柱中加入蒸餾水或20%乙醇至幾厘米的高度,利用重力作用讓柱中液體從底端管線(xiàn)中流出,排出氣泡,在柱底預留至少1厘米高度的液體,并用堵頭連接管線(xiàn)的錐形接頭。
         
          3)再次混勻膠懸液,確保懸液均一,借助玻璃棒將膠懸液盡可能一次性貼壁倒入柱管中,用裝柱緩沖液加滿(mǎn)柱管。
         
          4)將適配器管線(xiàn)連接注射器,排出適配器管線(xiàn)中的氣泡。逆時(shí)針旋轉調節帽將固定帽、調節帽旋轉至調節桿最底端。
         
          5)打開(kāi)底部管線(xiàn)堵頭,將適配器垂直放在玻璃管上,順時(shí)針擰緊固定帽,請確保整個(gè)操作在一條直線(xiàn)上完成。注意不要引入氣泡。
         
          6)按照填料說(shuō)明書(shū)推薦的流速運行設備,不同的填料推薦的裝柱流速不同,很多填料會(huì )需要分2個(gè)階段進(jìn)行裝柱,第一步用推薦流速加快沉降,第二步用更高的流速(不超過(guò)推薦流速的30%)壓實(shí)填料,請在流速開(kāi)啟前閱讀填料說(shuō)明書(shū)。繼續運行至膠面穩定,讀取刻度并記錄。
         
          7)停止設備流速,將適配器順時(shí)針向下擰至讀取刻度下2~3mm,繼續運行流速,如果膠面發(fā)生改變,可以重新調節適配器高度。裝柱完成。
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